摘要：目的：采用微生物方法适用性实验的方式，分析抑菌性药品抑菌活性。方法：选取喹诺酮类、四环素类、三唑类药物作为研究对象。采用薄膜过滤法，培养基稀释法（平皿法）、使用中和剂等联合方法，选用6种试验菌，分别进行3次独立平行的微生物计数方法和控制菌检查法的适用性实验。试验组和稀释剂对照组的菌回收率，反应了药物和稀释剂的抑菌活性能力。结果：本次微生物计数方法适用性实验的菌回收率结果中，喹诺酮类药物有几种菌存在回收率低于50%的现象，结合相关因素，对其抑菌活性进行去除后重新检验。结论：从取样、供试液的制备、预实验以及优化实验条件几个方面入手，对药品微生物检验的方法展开了分析，并探讨了药品微生物检验的具体应用。希望在此基础上为药品微生物检验行业提供参考，促进检验行业的发展。
关键词：药品；微生物；检验
一、我国药品微生物检验工作的现状
研究在我国经济社会发展迅猛的新形势下，我国医疗水平也在不断发展，医药品的种类与功效都在不断提升，我国政府对于药品生产质量与安全要求越来越高，因此对于药品检验工作的技术要求也在不断提升，虽然我国在微生物检验工作方面不像西方发达国家那样有长期的发展基础，在检测资源与技术方面都存在一些缺陷，但在我国药品生产行业迅速发展以及我国对于药品检验规范性的要求下，我国药品微生物检验实验室也在不断提升质量管理的效果，但是由于管理模式的落后以及人员总体素质水平与时代要求存在差距等问题存在，我国药品微生物检验工作的质量依然有待进一步提升。
二、药品微生物检验的方法
1.取样
在微生物样品生产完成后，一般都会对其中的微生物进行质量检测，对微生物有着严格的限制标准。取样是药品微生物检验的第一步，通常情况下，在完成基础的药品样品取样后，需要以无菌或者少菌为标准，对其展开多次的检测，指导药品中微生物数量达到要求水平；其次，综合分析药品制备方法以及药品使用性能要求，制定科学的检验项目内容与计划。这一过程中，由于微生物本身具有突出的多样性特征，所以针对不同的微生物检验项目，其内容存在较大的差异性，且最终用于治疗不同的疾病时，其检验重点也有所不同。
2.试验菌培养方式以及菌液制备
取经30～35℃培养18～24h时的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌的胰酪大豆胨液体培养基培养物，用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液稀释至适宜菌落数的菌液备用。取经20～25℃培养48小时的白色念珠菌的沙氏葡萄糖液体培养基培养物，用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液稀释至适宜菌落数的菌液备用。取经20～25℃培养5～7天的黑曲霉的沙氏葡萄糖琼脂培养基培养物，用含0.05%吐温80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液，将孢子洗脱。然后，才有适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05%吐温80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液稀释制成适宜浓度的的黑曲霉孢子悬液备用。菌液制备后若在室温下放置，需要在2h内使用，如果保存在2～8℃，可以在24h内使用。黑曲霉孢子悬液可保存在2～8℃，在验证的贮存期内使用。
3.回收率的计算
试验组和稀释对照组的回收率都需要按照公式进行计算，每种菌的回收率也需按照要求进行计算。菌回收率计算公式：实验组和稀释对照组菌落数减去供试品对照组菌落数的值与菌液对照组的菌落数的比值。
4.消除药品抑菌活性的实验
常见消除抑菌活性方式：增加稀释液或培养基体积、加入适宜的中和剂或灭活剂、薄膜过滤法三种实验方法，本实验采用以上几种方式联合使用的实验方式。
喹诺酮类、四环素类、三唑类三种药物制备：取供试品10g，加入一定量的含中和剂的稀释剂，混匀，喹诺酮类、四环素类制备1:1000的供试液，采用薄膜过滤法进行实验，经过滤后，用含中和剂的冲洗液冲洗滤膜，转移滤膜菌面
朝上贴于胰酪大豆胨琼脂培养基和沙氏葡萄糖琼脂培养基平板上。三唑类采用平皿法取制备好的供试液置于直径为90mm的无菌平皿中，注入15～20mL温度不超过45℃的胰酪大豆胨琼脂培养基和沙氏葡萄糖琼脂培养基，混匀，凝固，倒置培养。
三、关于抑菌性药物的微生物检查与分析方法
1.选取喹诺酮类、四环素类、三唑类药物为对象，对其需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数结果进行分析，并计算回收率。3次独立的平行实验，所得到的稀释剂对照组回收率都符合50%～200%，实验组得到的回收率没有符合50%～200%的，说明样品对实验菌仍有抑制作用，优化检验方法，采用方法联用去除干扰后重新进行方法确认实验。微生物控制菌的方法确认，3次独立的平行实验，实验组和菌液组检出实验菌，样品组未检出菌，说明实验的选择方法可行，可以用于药品检测。
2.喹诺酮类对需氧的革兰阴性杆菌有强大的杀菌能力，对金葡萄菌有良好的抗菌作用；四环素类广谱抑菌剂，高浓度为杀菌剂，对革兰阴性菌、阳性菌及厌氧菌等具有作用；喹诺酮类、四环素类采用薄膜过滤法，5种细菌的回收率均低于50%，霉菌及酵母的回收率均符合50%～200%，采用用中和剂和薄膜过滤的联用方法后，喹诺酮类金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的回收率略低于50%，说明该类药物对这3中菌具有较强的抑菌性，同时也表明其不易被该三类微生物污染；四环素类药物对枯草芽孢杆菌的回收率略低于50%，说明该类药物对此菌株的抑制作用比较强，可认为此药物不易枯草芽孢杆菌污染。
3.三唑类为新一代抗真菌药，抗菌谱广，对白色念珠菌和黑曲霉菌具有较强的抑菌性。采用培养基稀释法（平皿法）和加入中和剂的联用方式，分别对各实验的菌回收率进行计算，细菌及白色念珠菌的回收率均符合50%～200%，曲霉的回收率低于50%，可认为此药物不易被霉菌污染。
四、药品微生物检验实验室提升质量管控效果的应用措施分析
1.降低药品使用的风险
相关研究结果表明，所有微生物药品在使用过程中均不可避免地面临一定的风险，所以在看重微生物药品本身高疗效性优势的同时，还需要关注其潜在的风险问题。比如，药物使用过程中往往会遇到由于微生物药品使用所诱发的不良反应问题，不仅影响治疗效果，甚至还会进一步加重患者病情。这种情况下，要求在药品使用之前，落实对药品微生物的检验工作。只有确定药品微生物符合限定标准，才能将其投入市场，以此来最大程度上降低药品使用风险，有利于保障消费者的身体健康。
2.针对试验操作人员进行与时俱进的培训安排
由于我国药品微生物检验技术不断优化、相应设备也在不断更新，对于药品检验工作人员的技能水平要求也越来越高，实际工作中要求试验检验人员有技术操作能力，并能够在检验前选择符合要求的检验手段，以提升药品微生物检验的效果，尤其是微生物培养方面，对于时间、环境的控制条件以及检验手法的选择对于检验结果的准确性有较大影响，微生物检验团队的工作人员必须是具有一定资质和专业学习经历的人员，并要通过相应的技术培训得到对微生物检验工作更高的判断能力，优化器微生物检验工作的质量。
结束语：
综上所述，微生物在药品中的应用是新世纪的一个重要发明，对各种疾病的治疗有着重大的意义，在医疗中具有非常广泛的应用。因此，不仅要做好检验样品的管控，同时还应做好设备、人员管理，为药品检验工作质量提升提供更加完备的保障。
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作者： 彭新玲
